Tìm hiểu về các loại cột trong phân tích sắc ký lỏng

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HCMKHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌCTIỂU LUẬN MÔNPHÂN TÍCH SẮC KÝTÌM HIỂU VỀ CÁC LOẠI CỘT TRONG PHÂN TÍCH SẮC KÝ LỎNGGVHD: TRẦN NGUYỄN AN SASVTH : TRẦN VĂN LỘC MSSV: 10080021 BÙI TRÌNH THU HiỀN 10232531 PHAN VĂN ĐỨC 10045881NỘI DUNGIIIIIII.Cấu tạo và vị trí, cơ chế tách của cột trên máy sắc ký1.Cấu tạo chung của một cột sắc ký.Lớp vỏ bảo vệ làm bằng hợp chất không gỉ hoặc thủy tinh. Lớp vỏ phân tích:chứa pha tĩnh Pha tĩnh:là những hợp chất hữu cơ được gắn lên chất mang rắn silica hoặc cấu thành từ silica . Chất nhồi cột: bao gồm một hỗn hợp nước hoặc dung dịch đệm với một hoặc nhiều dung môi hữu cơ phân cực tan được trong nước. 2.Vị trí cột trên máyLò cột (column ovent) Dùng để điều khiển cột táchCột tách là nơi xảy ra quá trình tách. Gồm cột tách và cột bảo vệ.1.Cột sắc ký hấp phụ.2.Cột sắc ký phân bố.3.một số loại cột chuyên dụng khác.1.Cột sắc ký hấp phụ.Pha tĩnh thường là chất rắn có khả năng hấp phụ.Thường là hợp chất vô cơ phân cực: SiO2,Al2O3.hay không phân cực như than hoạt tính.Được dùng cho những hợp chất hữu cơ và chủ yếu tan trong dung môi hữu cơ ít tan trong nước.Hấp phụ tốt những sản phẩm dầu mỏ,các axit béo và este của chúng.các amin thơm và các hợp chất hữu cơ khác.2.CỘT SẮC KÝ PHÂN BỐ:Cột đảo pha.Cột pha thường .. A. Cột pha đảo -Có chiều dài khác nhau:10-25 cm.đường kính 2=5 mm-Tính chất:pha tĩnh mang tính chất không phân cực -Gồm có:cột RP C18 (ODS),cột C8(octyl), cột C4, cột phenyl,cộtTMS-nguyên tắc: nó được dùng để phân tích những hợp chất từ ít phân cực đến phân cực trung bình-Được sử dụng trong phân tích các hợp chất trọng lượng phân tử thấp như thuốc hóa dược, các hợp chất pháp y, amino acid, carbohydrates, steroid, chất béo, các acid béo, các acid nucleic, nucleotid... *.cột đảo pha điển hình c18Cột C18 ( RP-18, ODS...) là loại cột có nền là silica, được biến tính gắn vào mạnh hydrocacbon C18H37 -(CH2)17-CH3. Các "dây" C18 chĩa ra để "nắm bắt, lưu giữ" các cấu tử.C18 là một cột không phân cực điển hình.Có nhiều kích thước và chiều dài khác nhau Ví dụ:cột pha đảo phenominex c18: 150-2mm.pha tĩnh 5 micromet. cột tách pha đảo là Reprosil Pur C18-AQ và Reprosil. 80 ODS-2 (150mm x 4.6mm, 5µm)các loai cột đảo pha c18:Cột đảo pha silicat: Sử dụng phân tích các hợp chất trọng lượng phân tử thấp như thuốc hóa dược, amino acid, carbohydrates, steroid, các acid béo..Cột TSKgel Silica: có kích thước lỗ đồng đều 10, 14, 15 hoặc 25 nm, ngoài được phủ một lớp monomer hoặc polymer là sự trùng hợp của octadecyl, cyano, hoặc nhóm phenyl. cột đảo pha polymer: Polymethacrylate-là được cấu trúc với các cỡ hạt khác nhau. Cho phép phân tích nhiều hợp chất cơ bản, làm giảm hấp phụ thứ cấp, nâng cao chất lượng phục hồi cho các peptide và protein do tương tác thứ cấp giảm.Cột TSKgel RPC có thể được làm sạch và loại bỏ nội độc tố bằng cách sử dụng Acid hoặc base mạnh.Cột TSKgel RPC sử dụng các loại nhựa không xốp (NPR) hoặc với các loại nhựa xốp có kích thước khác nhau. ..**các lọa cột pha đảo khác.Cột sắc ký pha đảo C8, kích thước cột L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thước hạt 5 mm.Cột đảo pha c4Cột đảo pha phenylCột đảo pha TMS.Hiện nay trên thị trường có rất nhiều dòng cột đảo pha khác nhau và ngày càng tiên tiến và hiện con người.C.Cột pha thườngCột silical trung tínhCột silical trên nền mạch cacbonCột cyano*.cột silical trung tính**.cột trên nền mạch cacbonsilical -SI-CH2-CH2-CNSI-CH2-CH2-NHSI-CH2-CH2-CH2OCH(OH)-CH2(OH)***.Cột cyano: Đa mục đíchKhả năng tương thích với các dung dịch nước trong pha động cao.Ít kỵ nước để rửa giải nhanh chóng của các phân tử kỵ nước.Duy trì và phân tách các chất phân tích mạnh mẽ cơ bản, bao gồm cả bậc bốn muối amoni.Đặc biệt ổn định và tuổi thọ cột, từ pH 2 pH 8.  Do đó, SKPĐ được ứng dụng nhiều và phổ biến hơn SKPT.3.CÁC LOẠI CỘT CHUYÊN DỤNG CHO TỪNG NHÓM CHẤTA.Cột sắc ký phân loại theo kích thước: sử dụng phân tách các hợp chất hữu cơ cao phân tử: protein, polymer sinh học, các hợp chất hữu cơ tan trong nước, tan trong dung môib.Cột sắc ký trong phân tách protin: TSKgel SW-loại cột được cấu trúc từ các hạt silica. Được gắn các nhóm Diol tương tác với các mẫu protein.C..Cột sắc ký ái lực :Kỹ thuật này hoạt động bằng cách cho phép các protein có ái lực với các ion kim loại được giữ lại trong một cột có chứa các ion kim loại cố định, chẳng hạn như coban, đồng, niken để thanh lọc histidine có chứa protein hoặc peptide, sắt, kẽm hoặc gallium để thanh lọc của phosphoryl hóa protein hoặc peptide.. D .Cột trao đổi ion :phân tách các hợp chất hữu cơ bằng phương pháp trao đổi anion hoăc cation. Được sử dụng để phân tích các protein, peptide, oligonucleotide DNA và RNA Cột trao đổi anion mạnh SAX (R4N+) Cột trao đổi anion yếu WCX (RCOO-) Cột trao đổi cation : Cột trao đổi cation mạnh SAX (R4N+) Cột trao đổi cation yếu WAX (DEAE- dimethyamion-etyth)III.Bảo vệ cột, rửa cột sau khi sử dụng.Nếu sử dụng chất ghép cặp là amine tứ cấp hoặc TBA cột cần rửa ngay sau khi kết thúc phân tích. Và dung dịch rửa thường là muối sodium perchlorate có ái lực rất mạnh đối với các hợp chất amine.Tài liệu tham khảo[1] . Các quá trình tách trong sắc kí lỏng của Ts. Nguyễn Bá Hoài Anh_Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên, 2000_65tr[2] . Đại cương về sắc ký lỏng của Ts . Nguyễn Bá Hoài Anh_ ĐH KHTN TP. HCM_23tr[3] . Tổng quan về sắc ký lỏng . www.tailieu.vn[4] . Cột sắc ký hplc_trên thị trường.  Thanks for listening!!!